A pesquisa foi conduzida com o objetivo de avaliar a metodologia, recomendada nas Regras para Análise de Sementes, para o teste de germinação em sementes de algodão deslintadas mecanicamente. Para tanto, utilizaram-se três lotes de sementes, cultivar IAC 20, em diferentes associações de temperaturas e períodos de avaliação (25°C/3 dias; 25°C/4 dias; 30°C/3 dias; 30°C/4 dias; 20-30°C/4 dias e 20°C/5 dias, em ausência de luz), em substratos rolos de papel toalha (dois tipos de papel), rolo de pano e entre areia, onde foram colocadas 50 ou 25 sementes. Paralelamente, foram conduzidos testes de tetrazólio e de emergência das plântulas em campo, para verificação dos resultados. Concluiu-se que o teste de germinação de sementes de algodão deve ser conduzido em substrato rolo de pano, umedecido na proporção de 2,5:1 (água:peso do substrato), à temperatura constante de 25°C. A antecipação da primeira contagem para o terceiro dia após o início do teste permite maior precisão na avaliação das plântulas; dentre as alternativas de substratos a utilização de areia é mais conveniente do que a de papel toalha.