O melhoramento de plantas geralmente é conduzido com o uso da reprodução sexuada, mesmo quando a espécie é multiplicada assexuadamente para a exploração comercial, como é o caso da cana-de-açúcar. Neste sentido, o desenvolvimento de procedimentos para avaliar a viabilidade de sementes de cana-de-açúcar é de grande interesse em programas de melhoramento genético. A pesquisa teve por objetivo o desenvolvimento de metodologia para avaliação da viabilidade de sementes de cana-de-açúcar (Saccharum spp.). Foram utilizadas três progênies, sendo duas provenientes de cruzamentos biparentais e uma progênie proveniente de policruzamento. Para o estudo do teste de germinação foram testados dois substratos (papel e areia), três temperaturas constantes de incubação (25, 30 e 35 oC), na presença de luz constante, e uma temperatura alternada (20-30 oC), com presença de luz por 8 horas (30 oC) e escuro por 16 horas (20 oC). As plântulas foram avaliadas em intervalos regulares de cinco dias. De acordo com os resultados obtidos, pode-se concluir que a temperatura interfere na germinação das sementes de cana-de-açúcar; sendo as condições mais favoráveis a alternância de temperatura (20-30 oC) e a temperatura constante de 30 oC, em substrato papel.